Geboren te Londen. Was een Engelse schrijver en arts. Hijk was de oudste zoon van Gaetano Polidori , een Italiaanse politieke emigrant- geleerde, en Anna Maria Pierce, een Engelse gouverneur. Hij had drie broers en vier zussen. Zijn zus, Frances Polidori, trouwde met de verbannen Italiaanse geleerde Gabriele Rossetti, en zo werd John postuum de oom van Maria Francesca Rossetti, Dante Gabriel Rossetti, William Michael Rossetti en Christina Georgina Rossetti. William Michael Rossetti publiceerde het dagboek van Polidori in 1911. Polidori was een van de eerste leerlingen van het recent opgerichte Ampleforth College uit 1804, en in 1810 ging hij naar de Universiteit van Edinburgh , waar hij een proefschrift over slaapwandelen schreef en op 1 augustus 1815 zijn graad als doctor in de geneeskunde behaalde. In 1816 trad Dr. Polidori in dienst van Lord Byron als zijn persoonlijke arts en vergezelde hem op een reis door Europa. Uitgever John Murray bood Polidori 500 Engelse ponden aan om een ​​dagboek bij te houden van hun reizen, dat later door Polidori's neef William Michael Rossetti werd uitgegeven. In Villa Diodati, een huis Byron gehuurd aan het Meer van Genève in Zwitserland, ontmoette het paar Mary Wollstonecraft Godwin, haar toekomstige echtgenoot, Percy Bysshe Shelley en hun metgezel (stiefzuster van Mary) Claire Clairmont. Op een avond in juni, nadat het bedrijf hardop had voorgelezen uit Fantasmagoriana , een Franse verzameling Duitse horrorverhalen, stelde Byron voor dat ze elk een spookverhaal zouden schrijven. Percy Bysshe Shelley schreef "A Fragment of a Ghost Story" en noteerde vijf spookverhalen verteld door Matthew Gregory "Monk" Lewis , postuum gepubliceerd als het Journal in Genève (inclusief spookverhalen) en bij terugkeer naar Engeland, in 1816, de dagboekaantekeningen vanaf 18 augustus 1816. Mary Shelley werkte aan een verhaal met haar man dat later zou evolueren naar Frankenstein. Byron schreef (en verliet snel) een fragment van een verhaal, 'A Fragment', met de hoofdpersoon Augustus Darvell, die Polidori later gebruikte als basis voor zijn eigen verhaal, 'The Vampyre', het eerste gepubliceerde moderne vampier verhaal in het Engels. Afgewezen door Byron, reisde Polidori door Italië en keerde daarna terug naar Engeland. Zijn verhaal, 'The Vampyre', met de hoofdpersoon Lord Ruthven, werd zonder zijn toestemming gepubliceerd in het aprilnummer 1819 van New Monthly Magazine. In Londen woonde hij aan Great Pulteney Street (in Soho ). Tot groot verdriet van hem en Byron werd 'The Vampyre' uitgebracht als een nieuw werk van Byron. Byron's eigen vampierverhaal 'Fragment of a Novel' of 'A Fragment' werd gepubliceerd in 1819 in een poging om de verwarring weg te nemen, maar, in voor- en tegenspoed, werd 'The Vampyre' aan hem toegeschreven. Polidori's lange, door Byron beïnvloede theologische gedicht 'The Fall of the Angels' werd anoniem gepubliceerd in 1821. Overleden te Londen, zwaar belast door depressie en gokschulden. Ondanks sterk bewijs dat hij zelfmoord heeft gepleegd door middel van Pruisisch zuur (cyanide), gaf de lijkschouwer een oordeel van overlijden door natuurlijke oorzaken.